Бихӯред. Чудинов, В.А. Платонов, А.В. Александрова, С.Н. Эланский
Чанде пеш нишон дода шуд, ки занбӯруғи асомицетии Ilonectria crassa қодир аст, ки ба бехмеваҳои картошка сироят кунад. Ин асар аввалин таҳлили хусусиятҳои биологӣ ва муқовимат ба баъзе фунгицидҳои штамми I. crassa, ки аз картошка ҷудо карда шудааст. Пайдарпаии минтақаҳои хоси навъҳои "картошка" бо он замоне рост меомад, ки барои замбӯруғҳо, ки аз решаҳои наргис, женшен, аспен ва бук ҷудо карда шудаанд, лампаҳои савсан ва баргҳои лола гирифта буданд. Эҳтимол, бисёр растаниҳои ваҳшӣ ва боғӣ метавонанд захираи I. crassa бошанд. Штамми таҳқиқшуда илтиҳоби помидор ва картошкаро сироят кард, аммо тамоми меваи помидор ва лӯндаи картошкаи солимро сироят накард. Ин нишон медиҳад, ки I. crassa паразити захм аст. Арзёбии муқовимат ба флудиоксонил, дифеноконазол ва азоксистробин дар муҳити ғизоӣ самаранокии баланди ин доруҳоро нишон дод.
Нишондиҳандаи EC50 (консентратсияи фунгицид, ки суръати афзоиши радиалии колонияро нисбат ба назорати ғайри фунгицидӣ 2 маротиба суст мекунад) ба 0.4 баробар буд; Мутаносибан 7.4 ва 4 мг / л. Ҳангоми баҳодиҳии фитопатологии лӯндаи картошка ва таҳияи чораҳои ҳифзи растаниҳо имкони пайдоиши бемориро, ки I. crassa ба вуҷуд овардааст, бояд ба назар гирифт.
Рушди микроорганизмҳои фитопатогенӣ боиси талафоти зиёд дар ҳама марҳилаҳои парвариш ва нигоҳдории картошка мегардад. Ҳангоми банақшагирии чорабиниҳои муҳофизатӣ, одатан, микроорганизмҳои маъруф ба монанди навъҳои ҷинсҳои Алтернариа, Фусариум, Фома, Гелминтоспориум, Коллетотричум, Фитофтора ва ғайра ба инобат гирифта мешаванд. Бо вуҷуди ин, солҳои охир гузоришҳо дар бораи пайдоиши микроорганизмҳои нави фитопатогенӣ дар картошка зиёдтар ба назар мерасанд. Биологияи онҳо суст омӯхта шудааст, самаранокии фунгицидҳое, ки дар картошка нисбат ба онҳо истифода мешаванд, маълум нест, усулҳои ташхис кор карда нашудаанд. Бо рушди оммавӣ, онҳо метавонанд ба зироати картошка зарари калон расонанд. Яке аз ин микроорганизмҳо аскомицети замбӯруғи Ilonectria crassa (Wollenw.) A. Cabral & Crous мебошад, ки онро муаллифон бори аввал дар бехмеваҳои картошка кашф кардаанд (Чудинова ва дигарон, 2019).
Дар ин асар натиҷаҳои таҳлили штамми I. crassa, ки аз лўндаи картошка ҷудо карда шудааст, оварда шудааст. Морфологияи колонияҳо ва сохторҳои миселии I. crassa, пайдарпаии нуклеотидҳои минтақаҳои хоси ДНК, вирусулият ба картошка ва помидор ва муқовимат ба баъзе фунгицидҳои маъмул омӯхта шуданд.
Мавод ва усул
Мо штамми I. crassa 18KSuPT2-ро, ки соли 2018 аз лӯндаи сироятии картошкаи дар минтақаи Кострома парваришёфта ҷудошуда истифода кардем. Ба луоб навъи пӯсидаи хушк бо пуфаке бо мицелияи қаҳваранги сабук пӯшонида шудааст. Бо истифода аз сӯзани стерилизатсияшуда, мицелияи занбӯруғӣ ба табақи Петри бо воситаи агар агар ворид мешуд (пивои пиво 10%, агар 1.5%, пенисиллин 1000 У / мл). Заррҳоро дар торикӣ дар 24 ° C инкубатсия карданд.
Барои аксбардорӣ, баҳогузорӣ ба андоза ва морфологияи спора ва узвҳои спора аз микроскопи нурҳои Leica DM2500 бо камераи рақамии ICC50 HD ва микроскопи дурбинии Leica M80 бо камераи рақамии IC80HD (Leica Microsystems, Олмон) истифода шуданд.
Барои ҷудо кардани ДНК, мицелияи занбӯруғӣ дар муҳити нахӯди моеъ парвариш ёфта, сипас дар нитроген моеъ ях карда, гомогенизатсия карда, дар буфери CTAB инкубатсия карда, бо хлороформ пок карда, ду маротиба бо 2% спирт шуста шуд.
Усули истихроҷи ДНК дар мақолаи Кутузова ва дигарон муфассал тавсиф шудааст. (2017).
Барои муайян кардани намудҳо бо усулҳои молекулавӣ ва муқоиса бо дигар зотҳои маълум I. crassa, ПТР бо праймерҳо гузаронида шуд, ки ба афзоиши минтақаҳои ДНК-и мушаххас имкон доданд: ITS1-5,8S-ITS2 (праймерҳо ITS5 / ITS4, Уайт ва дигарон, 1990), минтақаҳои ген б -тубулин (Bt2a / Bt2b, Glass, Donaldson, 1995) ва омили дарозкунии тарҷума 1α (tef1α) (праймерҳои EF1-728F / EF1-986R, Carbone and Kohn, 1999). Ампликонҳои дарозии дилхоҳро бо истифода аз маҷмӯаи Evrogen CleanUp аз гел истихроҷ карданд. Минтақаҳои тақвиятёфта бо истифода аз маҷмӯаи пайдарпаии даврии BigDye® Terminator v3.1 (Applied Biosystems, CA, USA) дар секвенси худкори биосистемавӣ 3730 xl (Applied Biosystems, CA, ИМА) пайдарпай карда шуданд. Пасиҳамоии ҳосилшудаи нуклеотид барои ҷустуҷӯи гӯгирд дар пойгоҳи додаҳои GenBank дар Маркази миллии иттилооти биотехнологии ИМА (NCBI) истифода шуданд. Таҳлили филогенетикӣ бо истифодаи барномаи MEGA 6 гузаронида шуд (Tamura et al., 2013).
Муайян кардани вируссия дар меваҳои сабз аз помидори калонмева (навъи Дубрава) ва бехмеваи картошка (навъи Гала) гузаронида шуд. Ғайр аз он, барои симулятсия кардани зарар ба меваҳо ва бехмеваҳои зарардида, мо аз буридаҳои ҳамон меваҳо ва лӯндаҳо истифода кардем. Буридаҳои бехмева дар камераҳои намнок ҷойгир карда шуданд, ки он хӯрокҳои Петрӣ буданд ва дар поёни онҳо коғази филтрии тар буд. Дар рӯи коғаз слайд гузошта шуд, ки дар навбати худ, буридаҳои бехмева ё меваҳо гузошта шуданд. Буттаҳо ва меваҳои пурра низ ба зарфҳое гузошта шуданд, ки дар поёни онҳо коғази филтрии тар дошта бошанд. Дар маркази бурида (ё дар сатҳи солими лӯнда ё мева), пораи агар (5 × 5 мм) бо гифаҳои занбӯруғӣ пас аз 5 рӯзи парвариш дар болои агар-и зоғ ҷойгир карда шуд.
Арзёбии муқовимати штаммҳои замбӯруғӣ ба фунгицидҳо дар шароити лабораторӣ тавассути муҳити ғизоии агар анҷом дода шуд. Мо ҳассосияти доруҳои фунгицидиро Максим, КС (компоненти фаъоли флудиоксонил, 25 г / л), Квадрис, КС (азоксистробин 250 г / л), Скор, EC (дифеноконазол 250 г / л) омӯхтем (Феҳристи давлатӣ ..., 2020). Арзёбӣ дар хӯрокҳои Петрӣ дар муҳити wort-agar бо илова кардани доруҳои омӯхташуда дар консентратсияи моддаи фаъол 0.1; як; 1 промилл (мг / л) (барои флудиоксонил ва дифеноконазол), 10; даҳ; 1 промилл (барои азоксистробин) ва дар муҳити атроф бидуни фунгицид (назорат). Фунгицидро ба гудохта илова карда, то 10 ° С хунук карданд ва пас аз он, онро ба зарфҳои Петрӣ рехтанд. Блоки агар агар бо мицелияи занбӯруғӣ ба маркази табақи Петрӣ гузошта шуда, дар ҳарорати 100 ° C дар торикӣ парвариш карда шавад. Пас аз 60 рӯзи инкубатсия, диаметри колонияҳо дар ду самти перпендикуляр ба ҳам чен карда шуд; натиҷаҳои андозагирӣ барои ҳар як колония ба ҳисоби миёна гирифта шуданд. Таҷрибаҳо дар се нусха иҷро шудаанд. Дар асоси натиҷаҳои таҳлилҳо, EC24 баробар ба консентратсияи фунгицид ҳисоб карда шуд, ки суръати афзоиши радиалии колонияро нисбат ба назорати фунгицид ду баробар кам кард.
Натиҷа ва Гуфтугӯ
Дар хӯрокҳои петрӣ бо агар агар заҳра доранд, занбӯруғҳо бо мицелияи сафеди гулдор колонияҳо ба вуҷуд меоранд. Миёнаи зери мицелия зарди сурхранг шуд. Ҳангоми хушк шудани муҳит, замбурӯғ дар конодиофораҳои ягона ва муттаҳидшуда дар спородохияҳои хурд спораҳои ду намудро ба вуҷуд меорад. Макроконидияҳо дарозрӯя, силиндрӣ, аз як то се септа, дарозии миёнаи онҳо 27.2 μм бо диапазони арзишҳо аз 23.2 то 32.2 ,м, паҳнӣ - то 4.9 µм (расми 1). Дарозии миёнаи микроконидия 14.3 мкм ва диапазони арзишашон аз 10.3 то 18.1 мм, паҳнӣ то 4.0 мм. Ҳама аломатҳои макро- ва микроморфологӣ ба доираи тағирёбии намудҳои Ilyonectria crassa мувофиқат мекунанд (Cabral et al., 2012).
Пайдарпаии минтақаҳои ДНК-и мушаххаси навъи (ITS, b-tubulin, TEF 1α) комилан бо пайдарҳамии зотҳои I. crassa, ки мо қаблан омӯхтем, рост омад (Чудинова ва дигарон, 2019, Ҷадвали 1). Барои омӯзиши паҳншавии I. crassa дар минтақаҳои дигар ва таҳлили спектри фарҳангҳои зарардида, пайдарпаии аналогии ДНК дар пойгоҳи додаҳои GenBank таҳлил карда шуд (Ҷадвали 1). Мувофиқат аз 86 то 100% буд. Пайдарпайии ҳар се минтақаи ДНК-и штамми «картошка» I. crassa ба пайдарҳамии зотҳо, ки аз лампаи савсан ва решаҳои наргис дар Нидерланд ва аз решаи женшенги Канада ҷудо шудаанд, шабеҳ буданд. Мо натавонистем штаммҳои дигари I. crassa -ро бо се пайдоиши шабеҳи таҳлилшуда дар пойгоҳи додаҳои кушод пайдо кунем. Аммо, таҳлили пайдарпаии ITS ва б-тубулин, ки дар амонат гузошта шудааст, нишон дод, ки I. crassa дар баргҳои лола дар Бритониё мавҷуд аст. Занбӯруғҳо бо чунин пайдарпаии ИТС дар таҳлили микобиотаи решаҳои аспен дар Канада ва решаҳои бук дар Италия, бехмеваҳои картошка дар Арабистони Саудӣ муайян карда шуданд (Ҷадвали 1). Натиҷаҳои ин тадқиқот нишон медиҳанд, ки I. crassa паҳншавии глобалӣ дорад ва қодир аст ба намудҳои гуногуни растаниҳо сироят кунад.
Ҳангоми муайян кардани патогенӣ дар буридаи помидор ва картошка дар рӯзи 5, диаметри он ба 1.5 см расид ва штами таҳқиқшуда ба тамоми меваи помидор ва бехмеваи картошкаи солим осеб нарасонд. Аммо, сепалҳо ба помидор таъсир расонданд. Барои истисно кардани эҳтимоли олудашавӣ, як изолятҳои замбӯруғӣ аз мицелияи дар буридаи лӯндаи картошка таҳияшуда ба фарҳанги холис ҷудо карда шуданд. Он ба шиддати волидайн комилан шабеҳ буд. Эҳтимол, I. crassa паразити захм аст.
Табобати пеш аз шинондани лўндаи тухмӣ бо фунгицидҳо пайдоиши бемориҳо дар растаниҳоро дар давраи нашъунамо коҳиш медиҳад. Барои интихоби фунгицидҳои самарабахш арзёбӣ кардан муҳим аст, ки кадоме аз онҳо зидди I. сраса самаранок аст. Дар ин кор моддаҳои паҳншудаи фаъоли фунгицидҳо - флудиоксонил, азоксистробин, дифеноконазол омӯхта шуданд. Флудиоксонил ба якчанд омехтаҳо дохил карда шудааст, ки барои пошидани тухмҳо ва бехмеваҳои тухмӣ пеш аз шинонидан истифода мешаванд. Флудиоксонил (Максим) инчунин барои табобати лўндаи тухмӣ пеш аз нигоҳдорӣ истифода мешавад. Дифеноконазол ва азоксистробин инчунин ба як қатор доруҳое, ки барои коркарди маводи тухмӣ ва инчунин доруҳое, ки барои коркарди растаниҳои растанӣ пешбинӣ шудаанд, дохил карда шудаанд (Феҳристи давлатии ..., 2020).
Суръати афзоиши I. crassa дар расонаҳо (расми 2) бо консентратсияҳои гуногуни компонентҳои фаъол омӯхта шуд: флудиоксонил (EC50 = 0.4 ppm), азоксистробин (EC50 = 4 ppm) ва difenoconazole (EC50 = 7.4 ppm) (Ҷадвали 2). Ин препаратҳоро бар зидди I. crassa хеле муассир ҳисобидан мумкин аст, зеро онҳо EC50 аз консентратсияи тавсияшудаи препарат дар моеъи корӣ, ки барои табобати лӯндаҳо истифода мешаванд, хеле пасттар аст. Тибқи каталоги давлатӣ ... (2020), консентратсияи флудиоксонил дар моеъ барои табобати лўндаи картошка аз 500 то 1000 ppm, азоксистробин (дар моеъ барои табобати поёни ҷӯяк) - 3750-9375 ppm, дифеноконазол (дар моеъ барои табобати растаниҳои растанӣ) - 187.5– 625 ppm.
Ҷадвали 1. Мувофиқати пайдарҳамии пайдарпаии намудҳои мушаххаси шиддати 18KSuPT2 ва штаммҳои Илёонектрия crassa, ки дар пойгоҳи додаҳои Genbank мавҷуданд
Шиддат | Заводи мизбон, макони ихроҷ | Рақамҳои пайдарпаӣ дар GenBank, фоизи монандӣ | пайванд | ||
ITS | β-тубулин | TEF 1α | |||
17KSPT1 ва 18KSuPT2 | Лўндаи картошка, минтақаи Кострома | MH818326 | MH822872 | MK281307 | Чудинова ва дигарон, 2019, ин асар |
CBS 158/31 | Решаҳои Narcissus, Нидерланд | JF735276 100 | JF735394 100 | JF735724 99.3 | Кабрал ва дигарон, 2012 |
CBS 139/30 | Лампаи савсан, Нидерланд | JF735275 100 | JF735393 99.7 | JF735723 99.3 |
|
NSAC-SH-1 | Решаи Ginseng, Канада | AY295311 99.4 | JF735395 100 | JF735 / 725 99.6 |
|
RHS235138 | Барги лола, Бритониё | KJ475469 100 | KJ513266 100 | НД | Дентон, Дентон, 2014 |
MT294410 | Решаҳои Аспен, Канада | MT294410 100 | НД | НД | Рамсфилд ва диг., 2020 |
ER1937 | Бех, Италия | KR019363 99.65 | НД | НД | Тиззани, Ҳегӣ, Мотта. Пешниҳоди мустақим |
КАУФ19 | Лўндаи картошка, Арабистони Саудӣ | HE649390 98.3 | НД | НД | Гашгари, Гербави, 2013 |
НД = амонатгузорӣ нашудааст
Ҷадвали 2. Муқовимати Crassa Ilyonectria ба фунгицидҳо
(моддаи фаъол) | EC50, саҳ | ||||
Рӯзи 3 | Рӯзи 5 | Рӯзи 7 | |||
Назоратҳо | 17 ± 2 | 33 ± 5 | 47 ± 3 | ||
Quadris, KS (fsoxystrobin) | 18 ± 1 | 34 ± 2 | 48 ± 2 | ||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
11 ± 1 | 11 ± 1 | 12 ± 1 | |||
Максим, KS (флудиоксонил) | 16 ± 1 | 28 ± 2 | 48 ± 2 | ||
7 ± 1 | 13 ± 3 | 19 ± 4 | |||
5 ± 1 | 12 ± 1 | 17 ± 5 | |||
Skor, EC (дифеноконазол) | 18 ± 1 | 35 ± 2 | 48 ± 1 | ||
11 ± 1 | 24 ± 3 | 35 ± 4 | |||
11 ± 1 | 13 ± 1 | 17 ± 3 |
Дар кори мо, зотҳои I. crassa аз лўндаи картошка дар минтақаҳои Кострома ва Москва (Чудинова ва дигарон, 2019) ҷудо карда шуданд. Ҳангоми таҳлили микобиотаи лўндаи картошка дар Арабистони Саудӣ (Gashgari and Gherbawy, 2013) ҳиссаи баланди зотҳои занбӯруғӣ бо пайдарпаии ITS-и шабеҳи I. crassa ошкор карда шуд. Эҳтимол, I. crassa дар картошка он қадар кам нест, ки ба назар чунин менамояд. Таҷрибаҳои мо нишон доданд, ки замбӯруғ меваҳои зарардидаи помидорро сироят карда метавонад. Аз адабиёт маълум аст, ки I. crassa қодир аст дар хок сапротрофӣ инкишоф ёбад (Moll et al., 2016), инчунин ба растаниҳои гуногун, ҳатто аз ҷиҳати андозагирии дур, аз қабили наргис, савсан, женшен, асп ва бук таъсир мерасонад (Ҷадвали 1). як). Эҳтимол, бисёр растаниҳои ваҳшӣ ва боғӣ метавонанд захираи I. crassa бошанд. Гуфтаҳои боло нишон медиҳанд, ки ҳангоми таҳияи чораҳои муҳофизатӣ, бояд имконияти ба лӯниёи картошка таъсир расонидани ин занбӯруғро ба назар гирифт. Омодаҳои васеъ барои табобати бехмеваҳои картошка, ки дорои флудиоксонил, азоксистробин ва дифеноконазол мебошанд, нисбат ба I. crassa самаранокии баланди фунгицидӣ нишон доданд.
Ин кор аз ҷониби Бунёди Тадқиқоти Асосии Русия дастгирӣ карда шуд (Гранти No 20-016-00139).
Мақола дар маҷаллаи "Бюллетени ҳифзи растанӣ", 2020, 103 (3) нашр шудааст